Ang lala sa bitin adunay mga enzyme nga nag-hydrolyze sa carboxyl ester bonds.Ang mga substrate alang sa hydrolysis mao ang phospholipids, acetylcholine ug aromatic acetate.Kini nga mga enzyme naglakip sa tulo ka matang: phospholipase, acetylcholinesterase ug aromatic esterase.Ang arginine esterase sa lala sa bitin mahimo usab nga mag-hydrolyze sa sintetikong arginine o lysine, apan kini nag-una nga nag-hydrolyze sa protina nga peptide bond sa kinaiyahan, mao nga kini nahisakop sa protease.Ang mga enzyme nga gihisgutan dinhi naglihok lamang sa mga substrate sa ester ug dili makalihok sa bisan unsang peptide bond.Taliwala niini nga mga enzyme, ang biological nga mga gimbuhaton sa acetylcholinesterase ug phospholipase mas importante ug hingpit nga gitun-an.Ang ubang lala sa bitin adunay kusog nga kalihokan sa aromatic esterase, nga maka-hydrolyze sa p-nitrophenyl ethyl ester, a - o P-naphthalene acetate ug indole ethyl ester.Wala pa mahibal-an kung kini nga kalihokan gihimo sa usa ka independente nga enzyme o usa ka nahibal-an nga side effect sa carboxylesterase, labi na ang biolohikal nga kahulogan niini.Sa diha nga ang lala sa Agkistrodon halys Japonicus gi-react sa p-nitrophenyl ethyl ester ug indole ethyl ester, ang hydrolysates sa p-nitrophenol ug indole phenol wala makit-an;Sa kasukwahi, kung kini nga mga ester mo-react sa cobra Zhoushan subspecies snake venom ug Bungarus multicinctus snake venom, dali silang ma-hydrolyzed.Nahibal-an nga kini nga mga lala sa cobra adunay kusog nga kalihokan sa cholinesterase, nga mahimong responsable sa hydrolysis sa mga substrate sa ibabaw.Sa tinuud, si Mclean et al.(1971) mitaho nga daghang lala sa bitin nga sakop sa pamilyang Cobra ang maka-hydrolyze sa indole ethyl ester, naphthalene ethyl ester ug butyl naphthalene ester.Kini nga mga lala sa bitin gikan sa: cobra, black neck cobra, black lipped cobra, golden cobra, Egyptian cobra, king cobra, golden cobra mamba, black mamba ug white lipped mamba (D. aw kaila pa sa eastern rhombola rattlesnake
Ang lala sa bitin mahimong mag-hydrolyze sa methyl indole ethyl ester, nga mao ang substrate sa pagtino sa kalihokan sa cholinesterase sa serum, apan kini nga lala sa bitin wala magpakita sa kalihokan sa cholinesterase.Kini nagpakita nga adunay wala mailhi nga esterase sa cobra venom, nga lahi sa cholinesterase.Aron masabtan ang kinaiya niini nga enzyme, gikinahanglan ang dugang nga trabaho sa pagbulag.
1, Phospholipase A2
(I) Overview
Ang Phospholipase usa ka enzyme nga maka-hydrolyze sa glyceryl phosphate.Adunay 5 ka matang sa phospholipase sa kinaiyahan, nga mao ang phospholipase A2 ug phospholipase
A. , phospholipase B, phospholipase C ug phospholipase D. Ang lala sa bitin nag-una nga adunay phospholipase A2 (PLA2), pipila ka lala sa bitin nga adunay phospholipase B, ug uban pang mga phospholipase kasagarang makita sa mga tisyu sa hayop ug bakterya.Fig. 3-11-4 nagpakita sa aksyon site niini nga mga phospholipases sa substrate hydrolysis.
Taliwala sa mga phospholipases, ang PLA2 gitun-an pa.Mahimong kini ang labing gitun-an nga enzyme sa lala sa bitin.Ang substrate niini mao ang ester bond sa ikaduhang posisyon sa Sn-3-glycerophosphate.Kini nga enzyme kaylap nga makit-an sa lala sa bitin, hilo sa buyog, lala sa scorpion ug mga tisyu sa hayop, ug ang PLA2 abunda sa upat ka hilo sa bitin sa pamilya.Tungod kay kini nga enzyme nagbungkag sa pula nga mga selula sa dugo ug nagpahinabog hemolysis, gitawag usab kini nga "hemolysin".Gitawag usab sa ubang mga tawo ang PLA2 hemolytic lecithinase.
Una nga nakit-an ni Ludeeke nga ang lala sa bitin makahimo og usa ka hemolytic compound pinaagi sa paglihok sa lecithin pinaagi sa mga enzyme.Sa ulahi, Delezenne et al.nagpamatuod nga kon ang lala sa kobra molihok sa serum o yolk sa kabayo, kini mahimong hemolytic substance.Nahibal-an na karon nga ang PLA2 mahimong direktang molihok sa mga phospholipid sa erythrocyte membrane, makaguba sa istruktura sa erythrocyte membrane ug magpahinabog direktang hemolysis;Mahimo usab kini nga molihok sa serum o dugang nga lecithin aron makahimo og hemolytic lecithin, nga naglihok sa pula nga mga selyula sa dugo aron makahimo dili direkta nga hemolysis.Bisan pa nga ang PLA2 abunda sa upat ka pamilya sa mga lala sa bitin, ang sulod sa mga enzyme sa nagkalain-laing lala sa bitin gamay ra.Rattlesnake (C
Ang lala sa bitin nagpakita lamang ug huyang nga kalihokan sa PLA2.Ang talaan 3-11-11 nag-ilustrar sa pagtandi sa kalihokan sa PLA2 sa 10 ka dagkong lala sa lala nga mga bitin sa China.
Talaan 3-11-11 Pagtandi sa mga kalihokan sa phospholipase VIII sa 10 ka lala sa bitin sa China
Lala sa bitin
Pagpagawas sa tambok
Aliphatic acid,
Cjumol/mg)
Hemolytic nga kalihokan CHU50/^ g * ml)
Lala sa bitin
Ipagawas ang mga fatty acid
(^raol/mg)
Hemolytic nga kalihokan "(HU50/ftg * 1111)
Najanaja atra
9. 62
onse
Micracephal ophis
lima ka punto usa ka zero
kalyspallas
8. 68
duha ka libo ug walo ka gatus
gracilis
V, acute
7. 56
* * #
Ophiophagus hannah
tres punto walo duha
usa ka gatos ug kwarenta
Espesye sa tanom nga bulak ang Bnugarus fasctatus
7,56
duha ka gatus ug kawaloan
B. multicinctus
usa ka punto siyam unom
duha ka gatus ug kawaloan
Viper ug russelli
pito ka punto zero tulo
T, mucrosquamatus
usa ka punto otso singko
Siamensis
T. stejnegeri
0. 97
（2） Pagbulag ug pagputli
Ang sulod sa PLA2 sa lala sa bitin dako, ug kini mao ang lig-on sa kainit, acid, alkali ug denaturant, mao nga kini sayon sa pagputli ug pagbulag PLA2.Ang kasagarang pamaagi mao ang una nga paghimo sa gel filtration sa krudo nga hilo, dayon ipatuman ang ion exchange chromatography, ug ang sunod nga lakang mahimong masubli.Kinahanglan nga matikdan nga ang freeze-drying sa PLA2 human sa ion-exchange chromatography kinahanglan nga dili hinungdan sa aggregation, tungod kay ang freeze-drying nga proseso kasagaran nagdugang sa ionic nga kalig-on sa sistema, nga usa ka importante nga hinungdan nga hinungdan sa aggregation sa PLA2.Dugang pa sa mga kinatibuk-ang pamaagi sa ibabaw, ang mosunod nga mga pamaagi gisagop usab: ① Wells et al.② Ang substrate analogue sa PLA2 gigamit isip ligand alang sa affinity chromatography.Kini nga ligand makagapos sa PLA2 sa lala sa bitin nga adunay Ca2+.Ang EDTA kay kasagarang gigamit isip eluent.Human matangtang ang Ca2+, ang kalambigitan tali sa PLA2 ug ligand mikunhod, ug kini mahimong mabulag gikan sa ligand.Ang uban naggamit sa 30% nga organikong solusyon o 6mol/L urea isip eluent.③ Ang hydrophobic chromatography gihimo uban sa PheiiylSephar0SeCL-4B aron makuha ang pagsubay sa PLA2 sa cardiotoxin.④ Ang anti PLA2 nga antibody gigamit isip ligand sa paghimo sa affinity chromatography sa PLA2.
Sa pagkakaron, daghang gidaghanon sa lala sa bitin nga PLAZ ang naputli.Tu ug uban pa.(1977) naglista sa PLA2 nga giputli gikan sa lala sa bitin sa wala pa ang 1975. Sa bag-ohay nga mga tuig, daghang mga artikulo bahin sa pagbulag ug pagputli sa PLA2 ang gitaho matag tuig.Dinhi, nagpunting kami sa pagbulag ug pagputli sa PLA sa mga iskolar sa China.
Chen Yuancong ug uban pa.(1981) nagbulag sa tulo ka espisye sa PLA2 gikan sa lala sa Agkistrodon halys Pallas sa Zhejiang, nga mahimong bahinon sa acidic, neutral ug alkaline nga PLA2 sumala sa ilang isoelectric nga mga punto.Sumala sa toxicity niini, ang neyutral nga PLA2 mas makahilo, nga giila nga presynaptic neurotoxin Agkistrodotoxin.Ang alkaline nga PLA2 dili kaayo makahilo, ug ang acidic nga PLA2 halos walay toxicity.Wu Xiangfu ug uban pa.(1984) nagtandi sa mga kinaiya sa tulo ka PLA2s, lakip ang gibug-aton sa molekula, komposisyon sa amino acid, N-terminal, isoelectric point, thermal stability, enzyme activity, toxicity ug hemolytic activity.Gipakita sa mga resulta nga sila adunay parehas nga gibug-aton sa molekula ug kalig-on sa kainit, apan adunay daghang mga kalainan sa ubang mga aspeto.Sa aspeto sa kalihokan sa enzyme, ang kalihokan sa acid enzyme mas taas kay sa kalihokan sa alkaline nga enzyme;Ang hemolytic nga epekto sa alkaline nga enzyme sa pula nga mga selyula sa dugo sa ilaga mao ang labing kusog, gisundan sa neutral nga enzyme, ug ang acid enzyme halos dili hemolyzed.Busa, gituohan nga ang hemolytic nga epekto sa PLAZ nalangkit sa bayad sa molekula sa PLA2.Zhang Jingkang et al.(1981) naghimo og mga kristal nga Agkistrodotoxin.Tu Guangliang et al.(1983) nagtaho nga ang usa ka makahilo nga PLA nga adunay isoelectric nga punto sa 7. 6 gilain ug giputli gikan sa lala sa Vipera rotundus gikan sa Fujian, ug ang pisikal ug kemikal nga mga kabtangan niini, komposisyon sa amino acid ug ang han-ay sa 22 amino acid residues sa N -terminal gitino.Li Yuesheng ug uban pa.(1985) gilain ug giputli ang laing PLA2 gikan sa lala sa Viper rotundus sa Fujian.Ang subunit sa PLA2 * mao ang 13 800, ang isoelectric nga punto mao ang 10.4, ug ang piho nga kalihokan mao ang 35/xnioI/miri mg。 Uban sa lecithin ingon nga substrate, ang kamalaumon nga pH sa enzyme mao ang 8.0 ug ang kamalaumon nga temperatura mao ang 65 ° C LD5 gi-inject sa intravenously sa mga ilaga.Kini mao ang 0.5 ± 0.12mg/kg.Kini nga enzyme adunay dayag nga anticoagulant ug hemolytic nga epekto.Ang makahilo nga molekula sa PLA2 naglangkob sa 123 nga nahabilin sa 18 nga mga klase sa amino acid.Ang molekula dato sa cysteine (14), aspartic acid (14) ug glycine (12), apan adunay usa lamang ka methionine, ug ang N-terminal niini mao ang serine residue.Kung itandi sa PLA2 nga nahimulag sa Tuguang, ang gibug-aton sa molekula ug ang gidaghanon sa mga residu sa amino acid sa duha nga isoenzymes parehas kaayo, ug ang komposisyon sa amino acid parehas usab, apan ang gidaghanon sa mga residu sa aspartic acid ug proline medyo lahi.Ang Guangxi king cobra snake venom adunay daghang PLA2.Shu Yuyan ug uban pa.(1989) gilain ang usa ka PLA2 gikan sa lala, nga adunay usa ka piho nga kalihokan nga 3.6 ka beses nga mas taas kaysa sa orihinal nga lala, usa ka molekular nga gibug-aton nga 13000, usa ka komposisyon sa 122 nga residu sa amino acid, usa ka isoelectric nga punto sa 8.9, ug maayo nga kalig-on sa kainit.Gikan sa obserbasyon sa electron mikroskopyo sa epekto sa batakang PLA2 sa pula nga mga selula sa dugo, makita nga kini adunay dayag nga epekto sa pula nga selula sa dugo sa tawo, apan walay klaro nga epekto sa pula nga mga selula sa dugo sa kanding.Kini nga PLA2 adunay dayag nga retardation nga epekto sa electrophoretic speed sa pula nga mga selula sa dugo sa mga tawo, kanding, rabbits ug guinea pig.Chen ug uban pa.Kini nga enzyme makapugong sa platelet aggregation nga gipahinabo sa ADP, collagen ug sodium arachidonic acid.Kung ang konsentrasyon sa PLA2 10/xg/ml~lOOjug/ml, ang platelet aggregation hingpit nga napugngan.Kung ang mga nahugasan nga platelet gigamit ingon mga materyales, ang PLA2 dili makapugong sa pagtipon sa konsentrasyon nga 20Mg / ml.Ang aspirin usa ka tigpugong sa cyclooxygenase, nga makapugong sa epekto sa PLA2 sa mga platelet.PLA2 mahimong makapugong sa platelet aggregation pinaagi sa hydrolyzing arachidonic acid sa synthesize thromboxane A2.Ang conformation sa solusyon sa PLA2 nga gihimo sa Agkistrodon halys Pallas venom sa Zhejiang Province gitun-an pinaagi sa circular dichroism, fluorescence ug UV absorption.Ang mga resulta sa eksperimento nagpakita nga ang nag-unang kadena nga pagpahiuyon niini nga enzyme susama sa parehas nga klase sa enzyme gikan sa ubang mga espisye ug genera, ang skeleton conformation adunay maayo nga kainit nga pagsukol, ug ang pagbag-o sa istruktura sa acid environment mabalik.Ang kombinasyon sa activator Ca2+ ug enzyme dili makaapekto sa palibot sa tryptophan residues, samtang ang inhibitor Zn2+ mobuhat sa atbang.Ang paagi diin ang pH nga kantidad sa solusyon makaapekto sa kalihokan sa enzyme lahi sa mga reagents sa ibabaw.
Sa proseso sa PLA2 nga pagputli sa lala sa bitin, usa ka dayag nga panghitabo mao nga ang lala sa bitin adunay duha o labaw pa nga PLA2 elution peak.Kini nga panghitabo mahimong ipasabut ingon sa mosunod: ① tungod sa paglungtad sa isozymes;② Usa ka matang sa PLA2 ang polymerized ngadto sa usa ka lain-laing mga PLA2 mixtures uban sa lain-laing mga molekular gibug-aton, kadaghanan niini anaa sa han-ay sa 9 000 ~ 40 000;③ Ang kombinasyon sa PLA2 ug uban pang sangkap sa lala sa bitin makapakomplikado sa PLA2;④ Tungod kay ang amide bond sa PLA2 na-hydrolyzed, ang bayad nausab.① Ug ② komon, nga adunay pipila lang ka eksepsiyon, sama sa PLA2 sa CrWa/w snake venom
Adunay duha ka sitwasyon: ① ug ②.Ang ikatulo nga kondisyon nakit-an sa PLA2 sa lala sa mosunod nga mga bitin: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^>er, Palestinian viper, sand viper, ug makalilisang nga rattlesnake km.
Ang resulta sa kaso ④ naghimo sa katulin sa paglalin sa PLA2 nga pagbag-o sa panahon sa electrophoresis, apan ang komposisyon sa amino acid dili mausab.Ang mga peptide mahimong mabungkag pinaagi sa hydrolysis, apan sa kasagaran sila gigapos gihapon pinaagi sa disulfide bond.Ang lala sa eastern pit rattlesnake adunay duha ka porma sa PLA2, nga gitawag ug type a ug type p PLA2 matag usa.Ang kalainan tali niining duha ka matang sa PLA2 usa lamang ka amino acid, nga mao, ang glutamine sa usa ka molekula sa PLA2 gipulihan sa glutamic acid sa laing molekula sa PLA2.Bisan kung ang eksaktong hinungdan niini nga kalainan dili klaro, kasagaran gituohan nga kini may kalabutan sa deamination sa PLA2.Kung ang PLA2 sa Palestinian viper venom gipainit uban ang krudo nga hilo, ang katapusan nga mga grupo sa mga molekula sa enzyme mahimong labi pa kaysa kaniadto.Gikan sa C PLA2 nga nahimulag gikan sa lala sa bitin adunay duha ka lain-laing N-terminal, ug ang gibug-aton sa molekula niini mao ang 30000. Kini nga panghitabo mahimong tungod sa asymmetric dimer sa PLA2, nga susama sa simetriko nga dimer nga naporma sa PLA2 sa lala sa silangang diamondback rattlesnake. ug western diamondback rattlesnake.Ang Asian cobra gilangkuban sa daghang mga subspecies, ang uban niini dili kaayo piho sa klasipikasyon.Pananglitan, ang gitawag kaniadto nga Cobra Outer Caspian subspecies nailhan na karon
Kini kinahanglan nga ipahinungod ngadto sa Outer Caspian Sea Cobra.Tungod kay adunay daghang mga subspecies ug kini gisagol, ang komposisyon sa lala sa bitin magkalainlain tungod sa lainlaing mga gigikanan, ug taas usab ang sulud sa isozymes sa PLA2.Pananglitan, hilo sa kobra
Labing menos 9 ka matang sa PLA2 isozymes sa r ^ ll species ang nakit-an, ug 7 ka klase sa PLA2 isozymes ang nakit-an sa hilo sa cobra subspecies Caspian.Durkin et al.(1981) gitun-an ang sulod sa PLA2 ug ang gidaghanon sa isozymes sa lain-laing mga lala sa bitin, lakip ang 18 ka lala sa kobra, 3 ka hilo sa mamba, 5 ka lala sa viper, 16 ka lala sa rattlesnake ug 3 ka lala sa bitin sa dagat.Sa kinatibuk-an, ang kalihokan sa PLA2 sa cobra venom taas, nga adunay daghang isozymes.Ang kalihokan sa PLA2 ug isozymes sa viper venom medium.Ang kalihokan sa PLA2 sa mamba venom ug rattlesnake venom ubos kaayo o walay kalihokan sa PLA2.Ang kalihokan sa PLA2 sa sea snake venom ubos usab.
Sa bag-ohay nga mga tuig, wala kini gitaho nga ang PLA2 sa lala sa bitin anaa sa porma sa aktibong dimer, sama sa silangang rhombophora rattlesnake (C. snake venom naglangkob sa type a ug type P PLA2, nga ang duha gilangkuban sa duha ka managsama nga subunits. , ug ang dimerase ra ang adunay
Kalihokan.Shen ug uban pa.misugyot usab nga ang dimer lang sa PLA2 sa lala sa bitin mao ang aktibong porma sa enzyme.Ang pagtuon sa spatial structure nagpamatuod usab nga ang PLA2 sa western diamondback rattlesnake anaa sa porma sa dimer.Piscivorous compound
Adunay duha ka managlahing PLA ^ Ei ug E2 sa lala sa bitin, diin ang 仏 anaa sa porma sa dimer, ang dimer aktibo, ug ang dissociated monomer niini dili aktibo.Lu Yinghua ug uban pa.(1980) dugang nga gitun-an ang pisikal ug kemikal nga mga kabtangan ug reaksyon kinetics sa E. Jayanthi et al.(1989) gilain ang usa ka sukaranan nga PLA2 (VRVPL-V) gikan sa lala sa bitin.Ang gibug-aton sa molekula sa monomer PLA2 mao ang 10000, nga adunay makapatay, anticoagulant ug mga epekto sa edema.Ang enzyme mahimo polymerize polymers uban sa lain-laing mga molekular gibug-aton sa ilalum sa kahimtang sa PH 4.8, ug ang ang-ang sa polymerization ug molekular gibug-aton sa polymers sa pagdugang sa sa temperatura.Ang gibug-aton sa molekula sa polimer nga namugna sa 96 ° C mao ang 53 100, ug ang kalihokan sa PLA2 niini nga polimer nagdugang sa duha.
Oras sa pag-post: Nob-18-2022